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在過去的十年見證多色熒光硬度計應用的急劇增加，部分原因，儀器和檢測器的設計以及引入一個新的熒光團繁多，包括合成材料和量子點的顯著進步。此外，活細胞成像已經越來越有用，覆蓋了整個可見光譜區域的基因編碼的熒光蛋白質的推出徹底改變了。在使用固定和活細胞和組織的多個熒光標記的主要優點是觀察能力的空間關系和亞細胞成分的時空動態，并監督不同的標記實體之間的潛在分子間的相互作用。一些先進的硬度計技術已應用于使用多種顏色的熒光標記，包括熒光漂白后恢復（FRAP），熒光相關光譜（FCS），熒光（福斯特）共振能量轉移（FRET），熒光原位雜交技術（FISH ）和熒光壽命成像（FLIM）。這些方法中有許多好處顯著能夠使用專門針對熒光蛋白在活細胞成像實驗。